二氧化碳培養(yǎng)箱的常見污染及防護(hù)措施

二氧化碳培養(yǎng)箱的常見污染

　　混入二氧化碳培養(yǎng)箱(細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境)中，對細(xì)胞生存有害的成分和造成細(xì)胞不純的異物都應(yīng)視為污染。不同的污染物對細(xì)胞的影響也有差別，有的影響是長期、緩慢和潛在的，而有的則能在很短的時間內(nèi)抑制細(xì)胞生長或產(chǎn)生有毒物質(zhì)細(xì)胞。根據(jù)污染源不同主要可以分為：生物性污染、化學(xué)性污染、物理性污染和氣溶膠污染。

　　1、生物性污染：

　　這是最常見也是危害最大的污染。如細(xì)菌、病毒、真菌，支原體等。這些污染源有可能是人為帶入，或是細(xì)胞在放入二氧化碳培養(yǎng)箱前已經(jīng)受污染，再或者是箱體本身沒有消毒干凈。體外培養(yǎng)的細(xì)胞自身沒有抵抗污染的能力，而培養(yǎng)基中所加抗生素的抗微生物污染的能力也是有限的，因而細(xì)胞微生物污染一旦發(fā)生往往是無法挽救的。

　　2、化學(xué)性污染：

　　二氧化碳培養(yǎng)箱中許多化學(xué)物質(zhì)都可以引起細(xì)胞污染。如細(xì)胞培養(yǎng)容器清洗過程中殘留的洗滌劑、加濕器中未純化的水、人為帶入的液體或氣體都可能成為化學(xué)性污染的來源。不同化學(xué)物質(zhì)對細(xì)胞污染是不一樣的，有的可能促進(jìn)或抑制細(xì)胞生長，有的甚至殺死細(xì)胞。

　　3、物理性污染：

　　培養(yǎng)環(huán)境中的物理因素，如溫度、放射線、振動、輻射(紫外線或熒光)會對細(xì)胞產(chǎn)生影響。物理性污染常常被人們所忽視或被籠統(tǒng)地歸為化學(xué)性污染，其主要是在代謝水平或分子水平上，影響細(xì)胞正常的生理過程。

　　4、氣溶膠污染：

　　氣溶膠是液體或固體微粒均勻地懸浮在氣體介質(zhì)中的分散體系，當(dāng)微粒是微生物時，就是微生物氣溶膠，如果這種微生物是病原性的，就是病原微生物氣溶膠。細(xì)菌、病毒等病原體通過氣溶膠可在人與人、人與環(huán)境之間傳播。

二氧化碳培養(yǎng)箱污染防控措施

　　1、二氧化碳培養(yǎng)箱的選擇：

　　二氧化碳培養(yǎng)箱的制造商們設(shè)計了多種不同的裝置去減少和防止污染的發(fā)生，其主要是防污染設(shè)計和消毒滅菌系統(tǒng)的改進(jìn)，以達(dá)到消毒滅菌的目的。如帶有紫外消毒功能的二氧化碳培養(yǎng)箱、帶HEPA過濾器的二氧化碳培養(yǎng)箱，以及帶高溫消毒的二氧化碳培養(yǎng)箱等，后者又分為高溫干熱和高溫濕熱兩類。這些裝置的滅菌能力各有千秋，紫外燈消毒范圍有限，距離燈越遠(yuǎn)，消毒能力越差。

　　HEPA過濾器的過濾膜孔徑有限，無法去除病毒和一些微小細(xì)菌，并且容易損耗，也有其局限性。相比而言，高溫消毒則是比較有效的方法。而高溫干熱和高溫濕熱也有所不同，由于蒸汽潛熱大、穿透力強，容易使蛋白質(zhì)變性或凝固，因此高溫濕熱的滅菌效率比干熱滅菌法高。

　　2、提高素質(zhì)：

　　人為因素和態(tài)度可以對環(huán)境、人和物起到一個正面或負(fù)面的影響。以安全為目的，實驗室內(nèi)的工作人員應(yīng)明白自身的態(tài)度和人為因素對實驗環(huán)境的重要性。因此，對實驗室工作人員進(jìn)行培訓(xùn)。

　　3、重視管理：

　　細(xì)胞室內(nèi)的二氧化碳培養(yǎng)箱應(yīng)由專人負(fù)責(zé)管理，定期對系統(tǒng)進(jìn)行校正，至少每年一次。各項數(shù)值一旦固定后，不要隨意調(diào)節(jié)，以免影響箱內(nèi)溫度、濕度、CO2濃度的波動，降低機器的靈敏度，同時還會影響二氧化碳培養(yǎng)箱內(nèi)的細(xì)胞生產(chǎn)狀態(tài)。

　　使用前，對二氧化碳培養(yǎng)箱的各項指標(biāo)進(jìn)行系統(tǒng)校正，并且對箱體和內(nèi)部進(jìn)行消毒處理，等各項數(shù)值穩(wěn)定一段時間后方可使用。一旦出現(xiàn)緊急問題，應(yīng)及時上報，應(yīng)由專業(yè)的人員進(jìn)行操作，馬上采取應(yīng)對措施，以免造成不必要的損失。

　　4、規(guī)范操作：

　　二氧化碳培養(yǎng)箱的使用雖然很簡單，但同樣需要規(guī)范操作。進(jìn)細(xì)胞室必須穿著實驗服(白大褂)，換上拖鞋或者穿一次性的鞋套。實驗操作時必須帶一次性手套，特別是打開二氧化碳培養(yǎng)箱前，必須先用75%的酒精噴壺噴洗雙手再開二氧化碳培養(yǎng)箱，再取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)板。顯微鏡下查看細(xì)胞培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)板后，再放回二氧化碳培養(yǎng)箱時，同樣也要噴酒精消毒。

　　二氧化碳培養(yǎng)箱的兩個門開關(guān)取(放)物要迅速，不可長時間開著，否則會影響CO2的濃度、溫度和濕度，以及造成污染。尤其是不要忘了關(guān)好里層的玻璃門。切記開門時不要對著二氧化碳培養(yǎng)箱說活，大口呼吸甚至是打噴嚏。

　　5、加強防護(hù)：

　　如果實驗人員生病而攜帶病菌，應(yīng)帶上口罩再進(jìn)細(xì)胞室，病情嚴(yán)重的則不宜進(jìn)行實驗。女性同志實驗時頭發(fā)應(yīng)梳起，防止皮屑污染及連帶事件的發(fā)生。如果實驗室條件允許，可以每人佩戴實驗帽、手套和口罩，以防污染二氧化碳培養(yǎng)箱及對實驗人員的自身的防護(hù)。

　　6、注重保養(yǎng)：

　　二氧化碳培養(yǎng)箱置于細(xì)胞室中，室內(nèi)需保持干燥，環(huán)境溫度不能超過30℃(建議：18℃-30℃)。二氧化碳培養(yǎng)箱放置在遠(yuǎn)離門窗、供暖設(shè)備和空調(diào)導(dǎo)管的地方，不能被陽光直接照射。二氧化碳培養(yǎng)箱的放置臺面必須水平避震且非易燃材質(zhì)，不能靠在墻壁或類似的建筑物上，其后部接電處和墻壁至少保留30cm的空間。一旦放好不宜再移動。